实验六十三 内标法测定酊剂中乙醇含量一、目的要求1.掌握采用标准对照法进行定量及计算的方法。2.掌握用内标法测定酊剂中乙醇含量的方法。二、实验原理在药物的GC分析中，许多药物的校正因子未知，此时乙醇含量，可采用无需校正因子的内标标准曲线法或内标对比法定量。由于上述方法是测量仪器的相对响应值（峰面积或峰高之比），故实验条件波动对结果影响不大，定量结果与进样量重复性无关，同时也不必知道样品中内标物的确切量，只需在各份样品中等量加入即可。本实验采用内标对比法测定酊剂中乙醇含量，方法是先配制已知浓度的标准样品，将一定量的内标物加入其中，再按相同量将内标物加入试样中。分别进样，由下式可求出试样中待测组分的含量（V/V）：三、主要仪器与试剂仪器 岛津GC-14C气相色谱仪，微量注射器（1μL），移液管（5ml，10ml），量瓶（100ml）。试剂 无水乙醇（AR），无水丙醇（AR，内标物），酊剂（大黄酊）样品四、操作步骤1.实验条件 色谱柱：Rtx-1毛细管柱 30 m×0.25 mm ×1μm ；柱温：90℃；气化室温度：140℃；检测器（FID）温度：120℃; 载气：9.8×104Pa；进样量：0.5μL。

2.溶液配制 （1）标准溶液制备 精密取无水乙醇5ml及无水丙醇5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。（2）样品溶液制备 精密量取酊剂样品10ml及无水丙醇5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。3.测定 在上述色谱条件下，取标准溶液与样品溶液，分别进样0.5μL乙醇含量，记录色谱图。4.结果计算 将色谱图中有关数据填入下表，并代入公式求样品中乙醇的百分含量（V/V）。组分名称bp（℃）tRAi/Ais（ci%）标准溶液乙醇78 丙醇97 试样溶液乙醇78 丙醇97 式中，Ai和As分别为乙醇和丙醇的峰面积；10为稀释倍数；5.00%为标准溶液中乙醇的百分含量（V/V）五、注意事项1.采用内标对比法定量时，应先考察内标标准曲线（以标准曲线中组分与内标峰响应值之比作纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标作图）的线性关系及范围，若已知标准曲线通过原点且测定浓度在其线性范围内，再采用内标对比法定量；同时，用于对比的标准溶液浓度与样品溶液中待测组分浓度尽量接近，这样可提高测定准确度。2.FID属于质量型检测器，其响应值（峰高h）取决于单位时间内引入检测器的组分质量。当进样量一定时，峰面积与载气流速无关，但峰高与在气流速成正比，因此当用峰高定量时，需保持载气流速稳定。但在内标法中由于所测参数为组分峰响应值之比（即相对响应值），所以以峰高定量时载气流速变化对测定结果的影响较小。六、思考题1.FID的主要特点是什么？本实验为什么要选择氢焰检测器？2.色谱内标法有哪些优点？在什么情况下采用内标法较方便？3.在什么情况下可采用已知浓度样品对照法？内标法定量时，进样是否要十分准确？